پروژه دانشجویی مقاله مطالعه خاصیت ضد میکروبی و ترکیب شیمیایی اسانس لعل کوهستان (Oliveria decumbens Vent.) با pdf دارای 10 صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد پروژه دانشجویی مقاله مطالعه خاصیت ضد میکروبی و ترکیب شیمیایی اسانس لعل کوهستان (Oliveria decumbens Vent.) با pdf کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
این پروژه توسط مرکز مرکز پروژه های دانشجویی آماده و تنظیم شده است
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی پروژه دانشجویی مقاله مطالعه خاصیت ضد میکروبی و ترکیب شیمیایی اسانس لعل کوهستان (Oliveria decumbens Vent.) با pdf ،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
مقدمه
استفاده از گیاه در درمان بیماریها بهویژه بیماریهای عفونی در سالهای اخیر روند رو به افزونی پیدا کرده است. استفاده بیرویه از داروهای شیمیایی جهت درمان بیماریهای عفونی منجر به ظهور ایزولههای مقاوم میکروبی
گردیده که هر روزه بر تعداد آنها افزوده میگردد
.(Dupont et al., 1996 ; Ayliffe et al., 1997) ظهور
سویههای مقاوم به داروهای شیمیایی، تلاش برای یافتن عوامل ضد میکروبی جدید را ضروری مینماید. گیاهان و ترکیبهای آنها شامل اسانسها و عصارههای گیاهی دارای توان بالقوه جهت جایگزینی با داروهای شیمیایی هستند
.(Srinivasan et al., 2001) این در حالی است که
عوارض جانبی این ترکیبها در مقایسه با داروهای شیمیایی کمتر است .(Cowan, 1999) استفاده از اسانسهای گیاهی در صنایع دارویی، مواد غذایی، طب مکمل و درمانهای گیاهی براساس خاصیت ضد میکروبی اسانسهای گیاهی در مقابل ارگانیسمهای مختلف استوار است
.(Nascimento et al., 2000; Rana et al., 1997)
از جمله گیاهان بـومی ایـران، مـیتـوان از گیـاه لعـل کوهستان نـام بـرد. جـنس Oliveria متعلـق بـه خـانواده Umbelliferae در ایران یک گونه بـا نـام O. decumbens
دارد کــه بــهطــور محلــی بــه آن “دن” یــا “دنــک” یــا
“موشکورک” میگویند و در مناطق گرمسـیری اسـتانهای کرمانشاه، خوزستان و ایلام میروید و علاوه بـر ایـران در جنوب شرق آناتولی، سوریه و عـراق نیـز پراکنـده اسـت
(مظفریان، .(1382 در طب سنتی ایران از این گیـاه جهـت درمان سوء هاضمه، اسهال و دردهای شکمی و رفـع تـب استفاده میشود. مطالعات مختلفی روی ترکیـب شـیمیایی اســانس حاصــل از گلهــای گیــاه انجــام گرفتــه اســت
Sajadi & Hosseini, 2002)؛ نجـفپـور نـوایی و میـرزا،
1381؛ (Amin et al ., 2005 و تـاکنون تنهـا یـک مطالعـه روی خاصــیت ضــد میکروبــی آن انجــام شــده اســت
.(Amin et al., 2005) در آن مطالعــه، بــازده اســانس استخراج شده از گلهای جمعآوری شده از جنوب شـیراز
%6 گزارش شده اسـت. ایـن اسـانس دارای %47 تیمـول،
%23 کارواکرول، %8/7 پاراسیمن و %18 گاما-ترپینن بـوده و اثرهای ضد میکروبی اسانس حاصل از گلهای گیاه لعـل کوهستان در مقابـل تعـداد محـدودی میکروارگانیسـم 3)
باکتری گرم مثبت، 3 باکتری گرم منفی، 1 قارچ رشتهای و یک مخمر) بررسی شده است. Amin و همکاران (2005)
گزارش نمودهاند که اسانس، فعالیت ضدمیکروبی وسـیعی در مقابل همه ارگانیسمهای مطالعه شده نشان مـیدهـد و این اثر با اثر آنتیبیوتیکهای تجاری قابل مقایسه میباشـد.
همچنین حداقل غلظت مهارکننـده رشـد (MIC) اسـانس حاصل از گلهای گیاه بـر باکتریهـای گـرم مثبـت و منفـی نشان میدهد که میزان حساسیت باکتریهای گـرم مثبـت و منفی به یک اندازه میباشد و این مقدار از حداقل غلظـت مهار کننده رشد برای قارچ و مخمـر مطالعـه شـده در آن تحقیق کوچکتر است. این بدین معنی است که باکتریها در مقایسه با قارچها نسبت به اسانس حساسترنـد. همچنـین قطر هاله عدم رشد برای باکتریهای گـرم مثبـت و قارچهـا یکسان میباشد. بازده اسانس استخراج شده از گلهای گیاه لعل کوهستان از منطقه کرمانشاه حدود %0/1 بـوده اسـت که دارای %28 تیمول، %29 کارواکرول، %15/4 پاراسـیمن،
%20/5 گاما-ترپینن میباشـد (نجـفپـور نـوایی و میـرزا،
.(1381 تحقیق دیگری کـه روی اسـانس لعـل کوهسـتان انجام شده نشان داده که اسـانس حاصـل از گلهـای گیـاه دارای %37/2 تیمول، %22/1 کارواکرول، %11/8 پاراسیمن
85 مطالعه خاصیت ضد میکروبی و ترکیب شیمیایی;
و %12/8 گاما-ترپینن است .(Sajadi & Hosseini, 2002)
باتوجه به مطالعات فوق، ترکیبهـای شـیمیایی و اثـر ضـد میکروبی اسانس حاصل از اندام هوایی گیاه لعل کوهستان بر 18 میکروارگانیسـم مختلـف بررسـی گردیـد و نتـایج بدست آمده با مطالعات گذشته مقایسه گردید.
مواد و روشها
شناسایی و جمعآوری گیاه
اندامهای هوایی گیاه لعل کوهسـتان (در مرحلـه کامـل گلدهی) در اردیبهشت ماه سال 1386 از منطقه کازرون در استان فارس جمعآوری گردید. پس از خشک کردن گیـاه در سایه و خـرد کـردن آن بـه قطعـات کوچـک، از انـدام هوایی گیاه به روش تقطیر با آب بـه مـدت 6 سـاعت بـا دستگاه کلـونجر (Clevenger apparatus) اسـانسگیـری بهعمل آمـد و پـس از جداسـازی اسـانس از سـطح آب، توسط سولفات سدیم آبگیری و در شیشههای تیره و در بسته نگهداری شد. مقدار3/4 میلـی لیتـر اسـانس بـه ازای
100 گرم وزن خشک گیاه حاصل شد .(%3/4V/W)
تجزیه اسانس لعل کوهستان
نظر به این که در مراجع Sajadi & Hosseini, 2002)؛
نجفپور نوایی و میرزا 1381؛ (Amin et al ., 2005 اجزاء اسانس این گیاه بوسیله GC/MS شناسـایی شـده بـود، در ایـن تحقیـق، اجـزای عمـده اسـانس بـا اسـتفاده از GC
جداسازی و با روش نرمالیزاسیون، درصـد آنهـا مشـخص گردیــد. آنــالیز اســانس بــا اســتفاده از دســتگاه گــاز کروماتوگراف، الگوی Varian CP-3800 طبق شرایط زیر انجام شد. ستون مورد استفاده CP Sil 8CB بـه طـول 60
متر و قطر 0/32 میلیمتر، ضخامت لایـه فـاز سـاکن 0/25
میکرومتر، گاز حامل نیتروژن و فشار گاز سر ستون 7 psi
بود. برنامهریـزی حرارتـی عبـارت بـود از50-230 C بـا افزایش دمای 3 C در دقیقه، درجه حرارت محفظه تزریق
117 C در دمای ترانسفرلاین 250 C تعیین شـد. سـپس 1 µl از اسانس لعل کوهسـتان بـه دسـتگاه تزریـق شـد و درصد نسبی اجـزای اصـلی اسـانس بـا اسـتفاده از مـواد استاندارد و مقایسه زمان بازداری شناسایی شد.
میکروارگانیسمهای مورد مطالعه
از بــین باکتریهــای گــرم مثبــت subtilis Bacillus
ATCC6051، Bacillus cereus ATCC1247، Listeria
monocytogenes ATCC7644، Staphylococcus
aureus ATCC25923، Staphylococcus epidermidis
ATCC 12228 و Staphylococcus saprophyticus
ATCC13518 و از بین باکتریهـای گـرم منفـی Shigella
(Clinical isolate) flexeneri، Escherichia coli
ATCC8739، typhimorium Salmonella
ATCC14028،Klebsiella pneumoniae ATCC10031،
aeruginosa ATCC 9027 Pseudomonas، Shigella
dysantri PTCC118، 231 RI vulgaris Proteus،
Vibrio cholera Inaba و aeruginosa Enterobacter
ATCC10006 و قـــارچ (field flavus Aspergillus
isolate) و Aspergillus niger ATCC 16404 و مخمـر
Candida albicans ATCC 10231 انتخاب گردید.
تعیین خاصیت ضد میکروبی اسانس با اسـتفاده از روش
دیسک دیفیوژن
سویههای باکتریایی روی نوترینت آگـار و سـویههـای قارچ و مخمر روی سابورودکستروز آگار در دمای 37 C
رشد داده شـدند. 2-3 کلنـی از کشـت شـبانه هـر سـویه میکروبـی بـه سـرم فیزیولـوژی اسـتریل افـزوده شـده و
Mahboobi et al.,
فصلنامه تحقیقات گیاهان دارویی و معطر ایران، جلد 24، شماره 1 59
کدورت آنها با 0/5 مک فارلند تنظیم گردید. سوسپانسیون باکتریایی (معادل (1×108 CFU ml-1 آماده بـر روی مـولر هینتـون آگـار و سوسپانسـیون قـارچی (105 CFU ml-1)
روی سابورودکستروز آگار تلقیح گردیده سپس دیسکهای کاغذی استریل (قطر 6 میلیمتر) حاوی 2 µl اسـانس کـه
در 20 میکرولیتـــر (dimethylsulfoxide) DMSO حـــل
شده است بر روی محیطهای کشت شـده قـرار داده شـد.
دیسک حاوی DMSO و دیسک آنتـیبیـوتیکی بـهعنـوان
کنتـرل روی کشـت قـرار داده شـد (
(2006 کشتهای باکتریایی و قارچی بـهترتیـب 24 و 48
ساعت در دمای 37 C انکوبه گردیدند. سپس قطـر هالـه عدم رشد (بر اساس میلیمتر) اندازهگیری گردید.
تعیین حداقل غلظت مهار کننده رشد با استفاده از روش
میکروبراث دایلوشن
در ایـن روش سـری دو برابـر رقـت از اسـانس لعـل کوهستان در %10 DMSO بـا غلظـت0/0125-2 µl ml-1
تهیه شد .(NCCLS, 2006) سپس 100 µl از هر رقت بـه هر چاهک از پلیت 96 تایی افـزوده شـد. اسـتاندارد تهیـه شده (معادل بـا 0/5 مـک فارلنـد) در مرحلـه قبـل رقیـق گردید، به نحوی که غلظت سوسپانسیون میکروبـی بـرای باکتریها 105 CFU ml-1 و بـرای قارچهـا 104 CFU ml -1
تنظیم گردید و در مورد باکتریهـا از محـیط مـولر هینتـون براث و در قارچها ومخمرهـا از محـیط RPMI 1640 کـه
pH آن با مورفولین پروپـان سـولفونیلیک اسـید (MOPS) 0/165 مولار به 7/2 رسـیده اسـتفاده گردیـد و 100 µl از سوسپانسیون میکروبی به هر چاهک افزوده شـد و پلیتهـا در دمای 37 بهمدت 24 ساعت برای باکتریهـا و بـهمـدت
48 ساعت برای قارچها انکوبه گردیدند. اولین چاهک کـه در آن هیچ رشدی مشاهده نمـیشـود بـهعنـوان MIC یـا
حداقل غلظت مهارکننده رشد تعیین گردید. سـپس 10 µl
از رقت MIC و چند رقت بالاتر از آن روی محیط کشـت منتقل شده و اولین رقت که در آن رشـدی مشـاهده نشـد بهعنوان MBC یا حداقل غلظت کشنده رشد تعیین گردید.
نتایج
اسانس حاصل از اندام هوایی گیاه لعـل کوهسـتان بـه رنگ زرد و دارای بویی نافذ شبیه به بوی اسانس آویشـن بود. بازده اسانس حاصل از اندام هوایی گیاه %3/4 بدست آمد. نظر بـه اینکـه در مراجـع اجـزای اسـانس بـهوسـیله
GC/MS شناسایی شده بودند، اجزای اسانس بهوسیله GC
جداسازی و به روش نرمالیزاسیون درصـد آنهـا مشـخص شد.
کلمات کلیدی:
ساخته شده توسط Rodrigo ترجمه شده
به پارسی بلاگ توسط تیم پارسی بلاگ.
